EDC/NHS交联方法的使用已经非常成熟了,一般将纳米粒子表面用羧基或氨基功能化处理,之后偶联纳米粒子与抗体上的羧基或氨基,完成抗体的偶联。我们在Thermo Fisher上找到了一般的步骤和注意事项。EDC和Sulfo-NHS在pH 4.5-7.2的水溶液中活化羧基具有佳活性,但Sulfo-NHS活化后的分子与氨基的反应在pH 7-8的水溶液中才具有佳活性。
基因芯片(genechip)(又称DNA芯片、生物芯片)的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法,在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过确定荧光强度强的探针位置,获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。
除了光引导原位合成技术外,有的公司如美国 Incyte Pharmaceuticals 等使用压电打印法 (Piezoelectric printing) 进行原位合成。其装置与普通的彩色喷墨打印机并无两样,所用技术也是常规的固相合成方法。做法是将墨盒中的墨汁分别用四种碱基合成试剂所替代,支持物经过包被后,通过计算机控制喷墨打印机将特定种类的试剂喷洒到预定的区域上。冲洗、去保护、偶联等则同于一般的固相原位合成技术。如此类推,可以合成出长度为 40 到 50 个碱基的探针,每步产率也较前述方法为高,可达到 99% 以上。
1.简易芯片
制作简易芯片时,使用机械臂把大量已知或未知序列的DNA片段点在--张很小的玻璃片(通常为2cmX2cm)或尼龙膜上,再经过物理吸附作用达到固定化(cDNA 芯片)。也可以直接在玻璃板表面进行化学合成,从而得到寡聚核苷酸芯片。将芯片与待研究的eDNA或其他样品杂交,经过计算机扫描和数据处理,便可以观察到大规模的基因群在不同组织、同一组织不同发育时期或不同生理条件下的表达基因调控情况。简易芯片一般的基因数量少(一般不超过2000),主要用于研究小部分特定基因的表达状态。简易芯片一般可以用于手工制作或者机械手点样。
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